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食用菌菌种的制作与保存技术
日期:2021-08-03作者:来源:中国农业科技信息网点击:
食用菌菌种的质量对食用菌生产至关重要。菌种的好坏,菌种的保存直接影响到食用菌的产品质量和产量、效益和成败,所以我们要制作优良的食用菌菌种,更要有优良的菌种保存方法,以保存菌种的生活力和优良性状,确保菌种纯种、无污染。
一、菌种制作 
食用菌菌种分三种即母种(一级种)、原种(二级种)、栽培种(三级种)
1. 制作母种(一级种)
1.1 菌种采集 
选择健壮无病虫害的食用菌子实体。经表面消毒后,放在无菌的厚纸上,使子实体菌褶向下,在通风条件下经过12--24h,等子实体放出孢子后,将纸折叠起来风干,放入塑料袋中,里面放几粒干硅胶,封好口,放入2--4℃冰箱中,可保存起来长期备用。
1.2 母种培养基制作 
配方:马铃薯200g、琼脂20g、葡萄糖20g、纯净水1000ml。
先把马铃薯切成大约1 cm大的小方块,放入1000ml纯净水中煮30min,过滤后加入琼脂、0.2-0.3%的磷酸二氢钾、再加入20g葡萄糖,溶解后分别装入试管,每个试管装量1/5-1/4,用棉塞封好试管口,外加塑料膜扎紧,放入压力灭菌锅1.3㎏/cm灭菌30min,待温度降至60℃将试管摆成30-35度倾斜面,冷却后观察几天,无受到杂菌污染即可接种,孢子液用灭菌的自来水将孢子稀释,在无菌操作环境下将孢子悬浮液移到试管琼脂斜面上,在25℃下培养,很容易萌发生长成菌丝,然后用石蜡封口置于4-5℃恒温箱中可保存6个月。
2. 制作原种(二级种)
将木屑78%、麦麸20%、糖1%、石膏1%加入水拌匀(100kg料加125kg水),培养基原料拌匀后拿试纸测ph值,ph值在6-7为宜,然后装入大口的罐头瓶至瓶肩部,将培养料压平压紧,抹干净瓶的培养料,拿完好无破损的塑料薄膜扎紧瓶口,放入压力灭菌锅1.4-1.5㎏/cm灭菌1.5-2h,冷却至25℃即可进行无菌接种,用接种针从母种试管斜面上挑取少量菌丝体接入瓶中,接种后在25℃恒温箱中培养30d菌丝可长满,即可作为原种(二级种)。
3. 制作栽培种(三级种)
栽培种就是将原种扩大繁殖,栽培种培养基制作和原种培养基制作一样,装瓶方法一样,但是因为栽培种菌种数量远远大于原种数量,生产上栽培种灭菌需利用室外专门的常压灭菌室灭菌,即盖一个两米见方的灭菌室,里面支一口大铁锅注满水,锅上放木板,将装入瓶中的培养基整整齐齐码在木板上方,点火加热至100℃,保持10-12h,待自然冷却至不烫手转入室内,到培养基降温至25℃即可进行无菌接种。一瓶750ml的原种可接70-75瓶左右的栽培种,接种后在25℃恒温环境中培养30天菌丝长满,即可作为栽培种(三级种)。原种和栽培种在培养菌丝期间每3d要检查一次,以去除被杂菌污染的菌种并做无害化处理。
二、食用菌菌种的保存方法
食用菌菌种保存的原理是利用低温、干燥、缺氧等手段来降低菌丝体的新陈代谢作用,以保持菌种在生理、形态、遗传上的稳定性。食用菌菌种保存的方法有很多,但对于中小规模的食用菌生产者来说,一些简单的土办法经济实惠,效果也不错,这里主要介绍4种常用的食用菌母种保存方法:
1. 斜面低温保存母种法
这是最普遍最简单的一种保存方法,也是在食用菌的生产中最常用的菌种保存方法。菌种在斜面培养基上成熟后,放到恒温箱中5℃保存,每隔7个月移植转管一次,在菌种的保存过程中要保证琼脂湿度适宜,此法适宜90%以上的食用菌菌种的保存,但不宜保存草菇菌种,因为草菇是高温型菌种,要在10-12℃保存,4-6℃低温容易引起菌丝体死亡。
斜面低温保存母种法保存时间有限,需经常转管移植,以补充菌丝体的营养、水分。这种保存方法虽简单易行,但缺点是对菌丝体创伤多,对人力消耗大,在食用菌大规模生产中还是要把此方法和其他方法结合起来,互相补充,减少转接次数。
2. 石蜡封口保存母种法
把蜡纸裁成7cm见方,放入高度酒精中浸泡2-3min,点燃酒精灯,将母种试管管口在酒精灯上烤一圈,用浸泡好的蜡纸扎紧试管口,将蜡纸完全浸入融化的石蜡液体中,使蜡纸紧紧贴在试管壁上,等石蜡凝固后检查不漏气,放到恒温箱中5℃保存。
3. 玻璃纸封口保存母种法
用明胶15g、硫酸铜2g、美蓝指示剂2滴溶于100ml热水中,配制成封口剂,将培养好的母种试管口朝下蘸上封口剂,贴上消毒好的玻璃纸。放到恒温箱中5℃保存,此法可保存菌种一年以上。
4. 菌丝体液体保存法
用马铃薯200g、葡萄糖20g、水1000ml配置好营养液,取菌丝块放入营养液中,有菌丝的一面朝上,接种好后在适宜的温度下培养,放到恒温箱中5℃保存,此方法菌种成活率高,保存时间长,一般33个月成活率为91.9%、42个月88.9%。
5. 麦粒保存法
首先选无病虫害的小麦,在20℃的水里浸泡5h,使麦粒的含水量在25%,取出凉干麦粒表面水分,装入试管,每个试管只能装1/3,然后用高压锅在压力120kg/cm下保持40min。将试管从高压锅中取出摇散麦粒,接入一滴菌丝悬浮液并摇一摇,使菌丝悬浮液均匀地沾满麦粒,放在温度25℃环境中培养,待大多数麦粒出现菌丝即可拿出,放在5℃恒温箱中保存。此法可保存母种一年半以上。
食用菌菌种接种要严格执行无菌操作规程。放在恒温箱里的菌种不可过分拥挤。温度要控制好,不可过高或者过低,温度过低培养基结冰脱水,菌丝容易衰老死亡,温度过高会加快细胞新陈代谢,达不到长期保藏的目的。移植转管前要使保藏的菌种置于适宜温度下活化才能进行。菌种培养时间不可过长,以免降低菌丝体活力,保存时环境湿度不宜过高,以防霉菌通过棉塞进入试管内,污染菌种.
菌种保存要有标签,标签必须规范、清晰,字迹清晰可见,标签上应标明菌种的名称、菌种的代数、接种的时间等。一级种、二级种、三级种要分别保存。菌种还需专人保存,严格防止混淆,菌种保存过程中要防止不相关人员进入保存室,防至菌种污染。